狼疮肾炎患者血清sFas和sFasL的变化

戴勇　王沙燕　齐晖　黄瑞芳　李体远　张阮章　罗秀霞

摘　要：目的　研究狼疮肾炎患者血清sFas和sFasL的变化及意义。方法　采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测正常对照18例和狼疮肾炎患者45例血清sFas和sFasL水平。结果　狼疮肾炎患者sFas和sFasL水平分别为(14±7)μg/L和(0.07±0.04)μg/L，与正常对照组(2.9±1.2)μg/L和(0.05±0.01)μg/L相比，差异有高度显著性意义(P＜0.01)。活动期sFas水平较缓解期明显增高，分别是(17±7)μg/L和(9±4)μg/L，P＜0.01；但sFasL活动期与缓解期差异无显著意义。狼疮肾炎血清sFas水平在白细胞减少、贫血、大量蛋白尿、肾功能减退、补体降低、ANA和抗RNP-Ab阳性时升高；而sFasL仅在肾功能异常时减低，与其他指标没有明显相关性。结论　sFas及sFasL参与了狼疮肾炎的发生，sFas可作为狼疮肾炎的活动性实验室指标。
关键词：狼疮肾炎；　可溶性Fas；　可溶性Fas配体；　细胞凋亡

Change and significance of serum soluble Fas (APO-1,CD95) and soluble Fas ligand in lupus nephritis

DAI Yong　WANG Shayan　QI Hui　et al
（Department of Rheumatic Nephropathy,Shenzhen People′s Hospital,Shenzhen 518020,China）

Abstract：Objective　To investigate the change and significance of serum soluble Fas (sFas) and soluble Fas ligand (sFasl) in lupus nephritis (LN).Method　Levels of sFas and sFasL in 42 LN patients and 18 healthy controls were determined by a sandwich ELISA.Results　The sFas and sFasL levels in 45 patients with LN were (14±7)μg/L and (0.07±0.04)μg/L，respectively,and significantly higher compared with 18 normal controls (2.9±1.2)μg/L and (0.05±0.01)μg/L,P＜0.01.The level of sFas in active LN patients was significantly higher than that of the inactive LN patients,P＜0.01.But there was no significant difference in sFasL level between active LN and inactive LN patients,P＞0.05.The sFas levels of LN patients with leukopenia,anaemia,proteinuria,hypocomplementemia,positive ANA and anti-RNP-Ab positive were significantly higher than those of LN patients with negative above indexes.Conclusion　sFas and sFasL levels are significantly increased in the patients with LN,which may be play an important role in the pathogenesis of LN,and sFas can be an index of LN activity.
Key words：Lupus nephritis;　Soluble Fas;　Soluble Fas ligand;　Apoptosis▲

　　系统性红斑狼疮(SLE)是一侵犯多系统的自身免疫病，常常伴有肾脏损害(称狼疮肾炎，LN)，其特征是血循环中存在一系列自身抗体。LN的发病与多基因、多因素有关，但其病因尚未明了。近年来发现，细胞凋亡异常在LN发病和病变进展中起着重要作用^［1］。Fas/AP-1(Fas)蛋白为近年来发现的一种调节细胞凋亡Ⅰ型跨膜糖蛋白受体，Fas配体(FasL)为表达在活性T细胞上的Ⅱ型膜蛋白。可溶性Fas配体(soluble FasL，sFasL)是FasL存在于血清中的另一种形式。Fas通过与FasL或sFasL结合，可以介导细胞凋亡。可溶性Fas(soluble Fas，sFas)是Fas基因的变异产物，其作用是对抗在Fas/FasL中相互作用的膜Fas分子，因而被认为是凋亡的抑制因子，而Fas、FasL和sFasL则被认为是凋亡的诱导因子。本研究采用ELISA检测了45例LN患者血清sFas和sFasL的水平，以探讨这些细胞凋亡抑制因子和诱导因子在LN中的变化及其临床意义。

1　资料与方法

1.1　病例选择：45例患者均符合1982年美国风湿病学会(ARA)修订的SLE诊断标准，均有持续性蛋白尿＞0.5 g/d、镜下血尿、管型尿或/和肾功能衰退。其中男性2例，女性43例，平均年龄26.7岁；病程在0.6～20年之间，平均病程为4.2年。患者中29例为活动期，16例为缓解期，判定标准均按文献［1］。所有患者近4周内未用过糖皮质激素类、免疫抑制剂类和血管扩张剂类药物，无感染表现。对照组18例，为本院职工及健康献血员，其中男2例，女16例，平均年龄22.6岁。
1.2　实验方法：45例患者均于治疗前清晨采血，离心后取血清，置－30 ℃保存待测。同步进行LN活动指标和肝肾功能检测。采用ELISA法检测sFas和sFasL，酶标仪450 nm处读吸光度值，根据标准曲线计算sFas和sFasL浓度值。sFas和sFasL检测试剂盒均购自美国Gemzyme公司，酶标仪使用瑞士产帝肯RAINBOW型反自动连续扫描酶标仪。
1.3　统计学处理：实验数据以±s表示，组间比较用t检验。

2　结果

2.1　LN患者血清sFas和sFasL水平：LN患者各组sFas水平与正常对照组相比，差异有高度显著性意义(P＜0.01)。其中活动期较缓解期明显增高(P＜0.01)。LN患者组sFasL也较正常对照组明显增高(P＜0.05)，但活动期与缓解期比较，差异无显著性(P＞0.05)，见表1。

表1　SLE患者血清sFas及sFasL变化水平(±s)　　　　μg/L

2.2　LN患者sFas和sFasL变化的临床意义：LN患者白细胞减少、贫血、大量蛋白尿、肾功能减退、补体降低、ANA和抗RNP-Ab阳性时，sFas水平增高；而sFasL仅在肾功能异常时减低，与其他指标没有明显相关性，见表2。

表2　LN患者sFas与临床活动指标的关系(±s)

　　近年来的研究表明，细胞凋亡异常在自身抗原形成、自身反应性淋巴细胞增多中起着重要作用。细胞凋亡可通过两条途径导致SLE的发生：首先，细胞凋亡紊乱可导致自身反应性T细胞持续存在，从而影响抗核小体免疫应答的强度；第二，SLE患者可能存在对凋亡的细胞吞噬缺陷，如：狼疮易感小鼠的补体介导的吞噬作用和SLE患者Fc受体介导的吞噬作用，如果SLE的确存在凋亡缺陷，便会使非淋巴细胞的凋亡不能及时清除，最终凋亡细胞膜完整性被破坏，免疫原性内容物外溢，从而诱发自身免疫应答^［2］。大量文献报道Fas/FasL系统在调节免疫系统的凋亡中起了关键性的作用。包括在胸腺中观察到的未成熟T细胞、T细胞调节的细胞毒性，以及活性T细胞的凋亡。Lpr及gld小鼠是系统性自身免疫性疾病的单基因模型，lpr小鼠缺乏Fas抗原基因表达，而gld小鼠则存在FasL基因的突变，所以推测这种Fas及FasL的缺陷导致体内产生大量免疫球蛋白(包括自身抗体)，而且发生与人SLE类似的自身免疫性疾病，并伴随淋巴增生。有人报道伴淋巴增生的SLE患者，Fas基因有不同程度的缺失^［3］，另一报道示SLE患者的FasL基因存在84 bp缺失^［4］，说明Fas或FasL的基因突变参与了人的SLE的致病过程。
　　sFas是Fas基因的变异产物，Cheng等^［5］从SLE病人PBMC得到的Fas cDNA进行分析时发现其核苷酸序列第700～762为缺失，导致整个跨膜区的丢失，由此产生sFas分子。sFas与FasL结合，干扰了Fas介导的凋亡过程，使得体内自身反应性细胞与激活的淋巴细胞增多而参与SLE病理过程。关于SLE患者血清中sFas的来源，动物实验证实Fas mRNA表达在小鼠大多数组织，因而各组织表达的Fas达到一定的变异范围都有可能成为sFas的潜在来源。如来自于SLE病人的周围血T细胞过度表达mRNA^［6］，它们是增加sFas水平的最有可能的来源之一。sFas的另一来源可能是自身免疫损害组织中的细胞。我们发现：与对照组相比，LN患者血清sFas明显增高，其中活动期LN患者sFas较缓解期增高明显。活动指标阳性者其sFas水平较活动指标阴性高。说明sFas参与了LN发病过程。同时sFas也可以作为LN活动度及评价治疗效果的重要指标。Jodo等^［7］对用皮质类固醇治疗的SLE患者血清中的sFas水平进行连续观察，结果sFas水平与临床和实验室资料之间有高度的相关性。由此推测sFas可作为监控SLE和LN的活动度的实验室指标，并考虑可用sFas作为对LN病人进行免疫干预的新对策。
　　Sano等^［8］对慢性肾小球肾炎病人的血清sFasL进行检测，发现与正常对照组相比无明显变化。我们的结果表明：sFasL在LN病人中明显增高，但增高程度远不如sFas明显。其中活动期LN患者与缓解期相比，无明显差别；活动指标阳性者其sFasL较活动指标阴性亦无明显差异。有人在活化的人T细胞体外培养液中，发现有活性的sFasL，提示LN患者血清sFasL有可能介导引起肾脏损害。与此相反，sFas能抑制Fas及FasL的相互作用，减轻Fas及FasL介导的免疫反应

本文编辑：葛虹■

作者单位：戴勇（518020 深圳市人民医院风湿肾内科）
　　　　　王沙燕（518020 深圳市人民医院中心实验室）
　　　　　齐晖（518020 深圳市人民医院中心实验室）
　　　　　黄瑞芳（518020 深圳市人民医院中心实验室）
　　　　　李体远（518020 深圳市人民医院中心实验室）
　　　　　张阮章（518020 深圳市人民医院中心实验室）
　　　　　罗秀霞（518020 深圳市人民医院中心实验室）

参考文献：

［1］Unowitz MB,Gladman DD.The lupus activity criteria count.J Rheu-matol,1984,11:783.
［2］张阮章，王沙燕，戴勇.Fas和细胞凋亡与肾脏病.国外医学泌尿系分册，1999，19：21-24.
［3］Rieux-Laucat F,Le Deist F,Hivroz C,et al.Mutation in Fas associated with human lymphoproliferative syndrome and autoimmunity.Science,1995,268:1347.
［4］Wu J,Wilson J,He J,et al.Fas ligand mutation in patient with systemic lupus erythematosus and lymphoproliferative disease.J Clin Invest,1996,54:1955.
［5］Cheng J,Zhou T,Liu C,et al.Protection from Fas-mediated apoptosis by a soluble form of the Fas molecule.Science,1994,263:1759-1762.
［6］Amasaki Y,Kobayashi S,Takeda T,et al.Up-regulated expression of Fas antigen (CD95) by peripheral na?ve and memory T cell subsets in patients with systemic lupus erythematosus (SLE):a possible mechanism for lymphopenia.Clin Exp Immunol,1995,99:245-250.
［7］Jodo S,Kobayashi S,Kayagaki N,et al.Serum levels of soluble Fas/APO-1 (CD95) and its molecular structure in patients with systemic lupus erythematosus (SLE) and other autoimmune diseases.Clin Exp Immunol,1997,107:89-95.
［8］Sano H,Asano K,Minatoguchi S,et al.Plasma soluble Fas and soluble Fas ligand in chronic glomerulonephritis.Nephron,1998,80:153-161.

收稿日期：1999-06-01