系统性红斑狼疮患者抗中性粒细胞胞浆
抗体的检测 孟庆功 袁国华 抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)是针对中性粒细胞和单核细胞胞浆蛋白的自身抗体。该抗体被普遍认为是系统性血管炎的标记抗体。间接免疫荧光法(IIF)检测ANCA有3种荧光图谱,胞浆型(c-ANCA)、核周型(p-ANCA)和非典型型(a-ANCA)。为探讨ANCA与系统性红斑狼疮(SLE)的关系及其临床意义,我们采用IIF法对63例SLE患者血清进行检测。 一、材料与方法
1.对象:SLE患者63例,为本科住院患者,年龄12～62岁,平均30岁,病程1个月至25年,平均3.8年。所有患者均符合美国风湿病协会1982年的诊断标准。另选择42例正常健康人作为对照。
2.ANCA检测:从正常献血员抗凝血中分离出中性粒细胞,用细胞离心涂片机制备抗原片,1000r/min离心4min,无水乙醇4℃固定5min,吹干。标本血清用0.01mol/LPBS1∶10稀释加在抗原片上,37℃孵育30min,PBS洗3次,每次5min,吹干。加1滴羊抗人IgG荧光抗体(军事医学科学院提供,用时1∶40稀释)于抗原片上,同上37℃孵育30min,PBS洗3次,吹干。加缓冲甘油封片,荧光显微镜下观察结果。中性粒细胞胞浆出现特异性荧光者为c-ANCA,细胞核周围出现特异性荧光者为p-ANCA,不典型荧光着色者为a-ANCA,胞浆及核周围均无特异荧光染色者为阴性。每例标本均进行2次以上检测证实。
3.抗核抗体(ANA)检测:以小鼠肝切片为底物,采用IIF。抗dsDNA抗体采用放射免疫分析法检测。抗ENA抗体采用对流免疫电泳法检测。
4.统计学处理:采用χ2检验。 二、结果
1.42份正常健康人血清均为阴性,63例SLE患者血清26例ANCA阳性(41.3％),其中p-ANCA15例,a-ANCA11例。
2.在ANCA阳性组,浆膜炎及多系统受累的SLE患者明显高于阴性组,而肝损害、肺部病变、皮损及心电图异常在两组之间没有差异(见表1)。抗dsDNA抗体阳性及中度以上贫血(血红蛋白<90g/L)的SLE患者在ANCA阳性组明显高于阴性组(见表2)。 表1 ANCA与SLE临床表现的关系[例数(％)] | 临床表现 | ANCA阳性(26例) | ANCA阴性(37例) | χ2值 | P值 | | 蝶形红斑 | 13(50.0) | 16(43.2) | 0.281 | >0.05 | | 盘状红斑及紫癜 | 19(73.1) | 25(67.6) | 0.220 | >0.05 | | 口腔溃疡 | 11(42.3) | 17(45.9) | 0.082 | >0.05 | | 腹水 | 4(15.4) | 5(13.5) | 0.044 | >0.05 | | 浆膜炎 | 13(50.0) | 6(16.2) | 8.274 | <0.01 | | 心电图异常 | 6(23.1) | 14(37.8) | 1.534 | >0.05 | | 肺部病变 | 4(15.4) | 5(13.5) | 0.044 | >0.05 | | 肝脏损害 | 6(23.1) | 3(8.1) | 2.794 | >0.05 | | 多系统受累 | 14(53.8) | 9(24.3) | 5.741 | <0.05 |
表2 ANCA与SLE其它实验室检查的关系[例数(％)] | 实验室检查 | ANCA阳性(26例) | ANCA阴性(37例) | χ2值 | P值 | | 24h蛋白尿>0.15g/L | 22(84.6) | 30(81.1) | 0.132 | >0.05 | | 血小板<100×109/L | 5(19.2) | 8(21.6) | 0.053 | >0.05 | | 白细胞<4.0×109/L | 10(38.5) | 15(40.5) | 0.028 | >0.05 | | 血红蛋白<110g/L | 21(80.8) | 22(59.5) | 3.200 | >0.05 | | <90g/L | 12(46.2) | 8(21.6) | 4.241 | <0.05 | | 血沉>20mm/lh | 22(84.6) | 31(83.8) | 0.008 | >0.05 | | ANA阳性 | 26(100) | 33(89.2) | 3.000 | >0.05 | | 坑ds-DNA抗体阳性 | 10/10 | 8/17(47.1) | 7.941 | <0.01 | | 抗Sm/抗阳性 | 5(19.2) | 11(29.7) | 0.888 | >0.05 | | 抗SSA/抗SSB阳性 | 10(38.5) | 20(54.1) | 1.488 | >0.05 |
三、讨论
deBandt等[1]在11例SLE患者血清中检测出1例p-ANCA,4例a-ANCA。Lawton和Lee[2]在46例SLE患者中检测出14例p-ANCA。而我们在63例SLE患者中发现15例p-ANCA,11例a-ANCA。在SLE患者血清中未见有c-ANCA的报道。这些不同的荧光图型是由多种抗原成分所致。C-ANCA的主要抗原成分为蛋白酶3(PR3),p-ANCA的主要抗原成分为髓过氧化物酶(MPO),a-ANCA的抗原成分目前尚不清楚。Afelera等[3]的研究发现,抗中性粒细胞胞浆抗原和核抗原的免疫应答不同,本文结果也未发现ANA与ANCA有相关性。
研究认为,ANCA能刺激活性氧离子(ROS)的释放,引起组织损伤[4]。对比ANCA阳性和阴性SLE患者的临床资料,在ANCA阳性患者中浆膜炎发生率为50％,而在ANCA阴性患者中仅为16.2％,二者差异有显著性(P<0.01)。在ANCA阳性组,多系统受累(53.8％)及中度以上贫血者(46.2％)均明显 高于ANCA阴性组(P<0.05)，提示ANCA与SLE的病情活动有关。Egner等[5]也观察到ANCA在SLE发 病或病情复发时升高。有人发现,活动性狼疮肾炎患者血清中ANCA阳性率明显高于非活动性狼疮肾炎患者。而血清抗dsDNA抗体在活动性狼疮肾炎患者血清中也普遍升高。本文结果显示,在ANCA阳性组抗dsDNA抗体阳性率明显高于ANCA阴性组(P<0.01)，推测ANCA可能与活动性狼疮肾炎有关。 作者单位:100853北京,解放军总医院风湿科 参考文献
1 de Bandt M,Meyer O,Haim T,et al. Antineutrophil cytoplasmic antibodies in rheumatoid arthritis patients.Br J Rheumatol,1996,35:38－43.
2 Lawton JWM,Lee SS. Antineutrophil cytoplasmic antibody (ANCA) in systemic lupus erythematosus (SLE).Am J Kidney Dis,1991,2:200.
3 Afelera A,Sebastiani GD,Galeazzi M, et al.Antineutrophil cytoplasmic antibodies in synovial fluid and in serum of patients with rheumatoid arthritis and other types of synovitis.Rheumatol,1996,23:10－15.
4 Ewert BH,Jennette JC,Falk RJ. The pathogenic role of antineutrophil cytoplasmic autoantibodies.Am J Kidney Dis,1991,2:188－195.
5 Egner W, Chapel HM. Titration of antibodies against neutrophil cytoplasmic antigens is useful in monitoring disease activity in systemic vasculitides.Clin Exp Immunol,1990,82:244. (收稿：1998－08－03修回：1998－12－21) |