自身免疫病患者可抽提核抗体谱与体液免疫的关系

邓安梅　仲人前　施笑梅　陈孙孝　孔宪涛

【摘要】　目的　探讨可抽提核抗原（ENA）抗体谱的临床意义及与其他免疫指标的关系。方法　对156份自身免疫病患者血清样本，采用免疫印迹法检测抗ENA抗体，经免疫浊度法检测Ig和补体。结果　（1）抗ENA抗体在自身免疫病有较高的检出率，其中抗平滑肌（Sm）抗体、抗U1核糖核蛋白抗体的阳性率在系统性红斑狼疮（SLE）中分别为36.3％、28.8%; 抗SSA和抗SSB抗体的出现在干燥综合征（SS）患者中分别为5/16和3/16。（2） 与正常对照和抗体阴性组比较，抗ENA阳性血清中IgG、IgM、IgA增高，分别为（21.6±15.0）、（1.7±0.8）、（2.2±1.2）g/L, 而C₃、C₄和总补体溶血活性（CH₅₀）水平下降分别为（1.08±0.37）、（0.21±0.12）、（98.±29） g/L；（3）随着抗ENA抗体免疫印迹条带数的增多，IgG增高，而IgM、C₃、C₄及CH₅₀与之相反，下降很明显；(4)C₃、C₄、CH₅₀与疾病活动性有相关关系。结论　抗ENA抗体阳性者存在体液免疫应答增加，且与抗ENA抗体免疫印迹条带数呈正相关。
【关键词】　自身免疫疾病　　自身抗体　　补体

Anti-ENA autoantibody profiles and humoral immune activation
DENG Anmei, ZHONG Renqian, SHI Xiaomei, et al.
Clinical Immunology Center, Changzheng Hospital, Shanghai 200003

【Abstract】　Objective　To study the clinical significance of anti-ENA autoantibody profiles and its relations with other immune markers.Methods　Anti-ENA autoantibodies were tested with Western-blot, while immunoglobulins and complements were detected quantitatively by turbidimetry.Results　The high positive rate of anti-ENA autoantibody was detected but not specific in several autoimmune diseases. The positive rates of anti-Sm and anti-U1RNP autoantibodies were 36.3% and 28.8% in SLE respectively. Anti-SSA and anti-SSB autoantibodies occirred in 31.3% and 18.8% patients with SS. The quantity of IgG, IgM and IgA was increased in anti-ENA antibody positive sera, while that of C₃,C₄ and CH₅₀ was decreased. The elevation of IgG and decrease of IgM, C₃ and CH₅₀ were correlated with the number of bands of anti-ENA autoantibodies by immunoblot. The association between clinical activity of diseases and C₃, C₄ and CH₅₀ were tested. Conclusion　Humoral immune activation was demonstrated in patients with positive NEA autoantibody and positively correlated with the number of bands of anti-ENA autoantibodies.
【Key words】　Autoimmune diseases　　Autoantibodies　　Complement

　　在自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮（SLE）、干燥综合征（SS）、皮肌炎、硬皮病患者的血清中，常存在特异性的自身抗体。相应自身抗原常是保守性蛋白或RNA，具有重要细胞生物学功能，如mRNA 剪切，转录，翻译，DNA复制，tRNA调控^［1］。自身抗体可能抑制这些大分子的功能，参与疾病的发病机制。
　　自身免疫性疾病的诊断指标之一，是检测出疾病特异性或相关性自身抗体。抗可抽提核抗原（ENA）的抗体虽不是疾病的特异性诊断指标，但与多种疾病的诊断，甚至发病机制密切相关。抗ENA抗体检测的方法学及临床意义已有众多报道^［2］，我们拟从抗ENA抗体谱与体液免疫应答的关系作一探讨。

材料和方法

　　1.抗ENA抗体阳性血清来自本院1994年8月～1997年8月收治的自身免疫性疾病住院患者，共计156例。其中，SLE 80例、皮肌炎40例、硬皮病20例、SS 16例。阴性对照组取自50例系统性红斑狼疮患者的抗ENA抗体阴性血清，所有患者均符合美国风湿病学会制定的诊断标准^［3-5］。正常对照组取自50份献血员血清，免疫荧光法证实抗核抗

表3　抗ENA抗体阳性血清中Ig和补体水平的变化(g/L)

50

10.8±5.2

1.5±1.0

1.90±1.10

1.30±0.50

0.28±0.60

120±30

　　2.应用免疫印迹法^［6］检测针对平滑肌抗原（Sm）、U1核糖核蛋白抗原（RNP）、核糖体抗原（Rib）的抗体，以及干燥综合征(SSA、SSB)的Ro、La抗原、硬皮病70 000抗原(Scl-70)和多发性肌炎抗原(JO-1)的抗体。ENA检测试剂盒为深圳恒佳生物技术公司生产，按操作说明书进行。反应后与标准条带位置比较，观察阳性条带并记数。
　　3.应用免疫浊度法^［6］检测IgG、IgA、IgM、C₃、C₄，检测仪器为美国 ARRAY全自动酶联分析仪。正常人血清含量分别为 （10.8±5.2）、（1.9±1.1）、（1.5±1.0）、（1.3±0.5）、（0.28±0.6） g/L。
　　4.应用绵羊红细胞溶血法^［6］检测总补体溶血活性（CH₅₀）。正常人血清含量为（120±30） U。
　　5.统计学方法：t检验、直线回归和相关性检验。

结果

　　1.抗ENA抗体谱的分布。在156例针对ENA 7种成分的抗体阳性中，抗Sm、抗U1RNP抗体阳性率在SLE中最高，分别为36.3％、28.8%;抗SSA和抗SSB抗体在16例SS患者中，分别为5例和3例阳性。抗Scl-70和抗JO-1抗体最常出现于硬皮病和皮肌炎中（表1）。

表1　不同疾病中抗ENA抗体阳性谱的分布（例）

80

29

23

16

13

4

3

6

表2　SLE患者抗ENA抗体与临床症状的关系（例）

29

26

10

12

5

　　3.抗ENA抗体阳性血清中Ig和补体水平的变化。IgG、IgA、IgM的含量较正常人均升高，其中以IgG最明显（P<0.01），差异有非常显著意义；而补体值却明显下降（P均<0.01），差异均有非常显著意义。IgA的升高与IgG呈正相关，而C₃、C₄的下降与IgM的升高呈负相关（表3，4）。
　　4.抗ENA抗体免疫印迹条带数与血清Ig、补体水平的关系。随着其阳性条带数的增加，血清IgG的水平显著升高，而血清IgM、C₃、C₄和CH₅₀的水平明显下降，IgA与ENA条带数之间无相关（表4）。
　　5.随着SLE病情缓解，ENA阳性条带数减少，而C₃、C₄量增加。对10例SLE患者中的抗ENA抗体和C₃、C₄作了随访调查。结果，随着治疗后症状缓解，患者中抗ENA抗体条带减少，而C₃、C₄量有所回升。治疗前ENA条带数平均值为2.50，C₃平均值为1.06 g/L，C₄平均值为0.16 g/L，而经过治疗上述平均值分别为1.20，1.20，0.25 g/L，三者差异均有显著意义（P<0.05）。

表4　抗ENA抗体阳性血清中Ig和补体水平的相关性

0.314^*

(t=3.36)

(t=4.13)

表5　抗ENA抗体阳性条带数与血清Ig、补体水平的关系 （g/L）

0.927^*

-0.989^**

0.106

-0.984^**

-0.771^*

-0.893^*

讨论

　　器官特异性自身免疫性疾病常存在组织器官特异性的自身抗体，如：糖尿病中抗胰岛细胞抗体、甲状腺病的抗甲状腺球蛋白和抗甲状腺微粒体抗体以及重症肌无力的抗乙酰胆碱受体抗体等，对明确诊断有重要意义。而器官非特异性自身免疫性疾病常缺乏特异性的自身抗体，表现为一种自身抗体可出现于多种自身免疫病中，如抗核抗体可见于SLE、SS等病，而一种自身免疫病出现多种自身抗体，如SLE可出现抗核抗体、类风湿因子^［7］等。
　　抗可抽提核抗原（ENA）的抗体是诊断自身免疫性疾病的指标之一。在临床筛选出本组156例抗ENA抗体阳性病例的基础上，对抗ENA抗体谱与体液免疫应答的关系进行了分析。结果表明，抗ENA抗体阳性谱的分布有一定的倾向性，SLE 患者中的抗ENA抗体与临床症状有关，抗ENA抗体阳性血清中，IgG、IgA、IgM的含量较正常人均升高，随着抗ENA抗体阳性条带数的增加，血清IgG的水平显著升高，而血清IgM、C₃和CH₅₀的水平明显下降，随着SLE病情缓解，抗ENA抗体条带数减少而C₃、C₄量增加，提示它们可作为病情预后的评估指标之一。
　　抗ENA抗体阳性患者的B淋巴细胞有普遍的激活，表现为Ig水平的增高，尤以IgG最为显著，IgG的升高还与ENA抗体条带数呈正比，说明B淋巴细胞呈多克隆激活、分泌多种自身抗体。与此相反，IgM水平相对下降，而且其水平与ENA抗体条带数呈负相关。这可能与Ig的类型转换机制有关。我们发现患者中的自身抗体如抗SSA和Ro、SSB和La及Sm抗体，型别主要为IgG型^［8］。这可能由于自身免疫反应，通过IgG而产生抗体依赖性细胞毒性（ADCC）作用并损伤细胞。另外，抗体本身也能穿透细胞膜进入细胞核，干扰细胞的正常功能，促使细胞凋亡^［9］。因此患者血清中的IgG和IgM相互结合，可作为观察病情活动程度的指标之一。　
　　补体C₃、总补体CH₅₀水平下降，提示在抗ENA抗体阳性患者，由于自身抗体增多、抗原抗体复合物形成以及组织损伤，均导致补体消耗增多，这是免疫激活的另一表现，同时也反映出可能存在这样一种发病机制，即：补体介导的细胞毒性作用。

作者单位：200003 上海，第二军医大学附属长征医院全军临床免疫中心

参考文献

　[1]　Tan EM. Antinuclear antibodies: diagnostic marker for autoinmmune diseases and probes for cell biology. Adv Immunol ,1989,44:93-95.
　[2]　Uyttenbroeck W, Cooreman W, Scharpe S.The presence of antibodies against extractable nuclear antigens in serum:a comparison of immunoblotting.Ann Clin Biochem,1993,30:83-89.
　[3]　Tan EM .1982 Revised criteria for systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheum ,1982,25:1271-1272.
　[4]　Tan EM. Preliminary criteria for the classification of systemic sclerosis (scleroderma).Arthritis Rheum ,1980,23:581-584.
　[5]　Tan EM. Criteria for diagnosis of Sjogren's syndrome. Rheum Dis Clin North Am ,1994,20:391-394.
　[6]　Gregorio GV, Davies ET, Mieli-Vergani G, et al. Significance of extractable nuclear antigens in childhood autoimmune liver disease. Clin Exp Immunol,1995,102:308-311.
　[7]　邓安梅，仲人前，孔宪涛.自身抗原SSA/Ro-52kd的克隆表达和应用.中国免疫学杂志，1997，14：59-62.
　[8]　邓安梅，仲人前，孔宪涛.SLE中临床免疫指标监测的意义.中华皮肤科杂志，1998,31：320-322.
　[9]　Alarcon SD,Rniz AA , Liorente L.Broken dogma:penetration of autoantibody into living cells.Immunl Today ,1996,17:163-165.

(本文编辑：臧焰)

(收稿：1998-12-11　　修回：1999-04-20)