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细胞因子检测试剂的规范化要求

细胞因子发现日多，其在生理，病理条件下的作用愈加重要。应用准确，敏感的方法检测细胞因子对了解其生物和生化特性至关重要。已有多种方法检测体液中的细胞因子，大体上可分为生物活性法和免疫分析定量法。仅就免疫分析法而言，国内、外发表了大量的细胞因子检测极其与临床关系的文章。其方法大多是购入试剂盒，按说明书检测，但对试剂盒是否符合标准，实际中单克隆抗体所针对何种校准物，常不求甚解，以致结果矛盾混乱，难以相互比较，徒劳而无效。

1996年11月，WHO与国际细胞因子协会曾共同组织研讨细胞因子的免疫测定问题，提出免疫测定中存在的主要问题为：

一、应用的标准物不同。

二、免疫分析法中单克隆抗体的识别的表位不同。

三、免疫分析法检出的细胞因子存在形式不同。

四、测定中的基质效应不同。

五、标本中存在可溶性受体，结合性蛋白，自身抗体等对实验的干扰。

为克服这些问题，与会专家起草了检验标准化建议，于1997年5月为WHO第三届细胞因子标准化非正式协商会采纳。1997年10月WHO的生物标准化专家委员会也予考虑。建议中强调对细胞因子试剂盒的规范化，主要内容为：

一、细胞因子免疫分析的标准物。由于试验和标准物的多样性，单克隆和试剂基质的不同，很难有单一的标准物适用于各种分析，但绝对需要应用统一的一级标准物用于校正二级标准物和工作标准。此种WHO的标准/参考物均有适用性说明，标有质量单位，它并非绝对质量值，而是特定方法的靶值。以WHO标准对工作标准进行标定，应有其可信限及统计学方法的说明，共组标准应有其结构，制备方法及生物物理特性（DNA序列PI等）的说明。

二、细胞因子免疫分析试剂的有效性。

在有效性评价中应用系列稀释测定代替单点测定，必须明确有效的检测浓度。试剂盒应满足以下要求：

（一）必须能检测不同形式的细胞因子：即抗体的免疫反应性能识别某一细胞因子的不同分子形式。

（二）可用适当懂得指示物来评价试剂性能：应用不同的重组DNA表达系统或氨基酸序列或其变异形式来检定免疫分析的分子识别能力。

（三）特异性，应确定试验的特异性：尤其是对同源分子的免疫反应性。

（四）试剂（包括抗体）的稳定性：应确定效价，批间的一致性，储存期间对敏感性或本底的影响，包被板的一致性（包被亲和性，孔间差等）。

（五）干扰：标本中的可溶性受体，细胞因子结合蛋白和拮抗剂，嗜异剂或自身抗体等均会影响结果，对此应有说明。

（六）基质效应：应估计到可能存在的基质效应。应明确标本为血清或抗凝血浆。

（七）标本采集：明确所应用的正确采集，处理及储存标本方法。

（八）重复性与回收试验：应用正确的方法在一定的温度和时间下进行，并说明所用的方法。

（九）线性与一致性。

（十）敏感性：计算敏感性的方法应予说明，敏感性应明确检测限和定量限，不仅是计量反映曲线的最低点。

（十一）分析效能：应确定实验的精密度，有明确的批内，批间变异值。

（十二）试剂的适应性：不同批试剂的分析变异，以及试剂在不同仪器上的分析变异。

以上对细胞因子试剂盒的标准化要求，试剂生产厂家严格遵守，以确保用户的分析质量和数据的准确性。科研与实验人员在选用试剂时也必须按这些要求审定试剂盒的质量和有效性，尤其应认真审阅说明书，对不符合要求者不应选用。

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