人类白细胞介素(IL)-10对哮喘患者肺泡巨噬细胞分泌
IL-6和IL-8的影响 宋满景 刘卓拉 李建强 康文娟 张永兴 采用支气管肺泡灌洗技术收集支气管哮喘患者肺泡巨噬细胞进行培养，并观测其分泌白细胞介素(IL)-6和IL-8的水平以及人类白细胞介素(hIL)-10对其分泌的影响,旨在探讨肺泡巨噬细胞分泌的细胞因子在哮喘发病机制中的意义以及IL-10对哮喘发生发展的作用。
一、对象与方法
1．对象：哮喘组：支气管哮喘患者15例,男10例,女5例,年龄(37.7±12.2)岁。均符合1997年中华医学会哮喘组制订的支气管哮喘的诊断标准及分级标准。对照组15例,男11例,女4例,年龄(42.4±10.1)岁。既往无肺部疾患,非过敏体质者。
2．方法：（1）支气管肺泡灌洗（BAL）参照文献［1］进行。(2)BAL回收液的处理：将37℃ 100 ml无菌生理盐水分两次注入支气管,在80～100 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）负压下吸 引回收液,回收液量为40%～60%,将回收液用双层无菌纱布过滤,4℃，1200 r/min离心10分钟，沉淀细胞,然后用D-hank液漂洗3次, 4℃，1200 r/min离心5分钟,弃上清液,用含20 %小牛血清的RPMI 1640培养基悬浮细胞,调整细胞浓度至2×109/L备用。（3）肺泡巨噬细胞的纯化与培养：将上述细胞在37℃ 5%CO2及饱和湿度培养箱中贴壁2分钟，分离纯化肺泡巨噬细胞,再次调整细胞浓度为1×109/L,分成3份，A份为空白对照,B份加10 mg/L脂多糖(LPS),C份加10 mg/L LPS和100 μg/L hIL-10（英国Pepro技术有限公司提供），3份均再加小牛血清后放入培养箱中培养24小时,经离心将培养上清 液与细胞完全分离,吸取上清液贮存于-70℃冰箱备用。（4）IL-6及IL-8检测采用双抗夹心ELISA法（美国Genzyme公司提供试剂盒)。
3．统计学方法：数据以±s表示,两组间比较采用t检验。
二、结果
肺泡巨噬细胞培养上清液中IL-6和IL-8水平见表1。 表1 肺泡巨噬细胞培养上清液中IL-6和IL-8水平(ng/L，±s) |
| 组别 | 例数 | A份 | B份 | C份 | | 对照组 | 15 | | IL-6 | | 140.66±45.94 | 188.19±63.99* | 32.09±4.98** | | IL-8 | | 130.26±40.54 | 178.09±52.96* | 30.06±3.86** | | 哮喘组 | 15 | | IL-6 | | 205.79±53.93△ | 246.76±55.22*△ | 32.41±4.56**▲ | | IL-8 | | 190.09±50.83△ | 235.66±52.20*△ | 31.31±3.66**▲ |
注：IL：白细胞介素 与同组A份相比，*P＜0.05；与同组B份相比，**P＜0.001；与对照组比较，△P＜0.05，▲P＞0.05 讨论 多种细胞包括巨噬细胞均可产生IL-6和IL-8,本研究结果显示,哮喘患者支气管肺泡灌洗液中肺泡巨噬细胞分泌的IL-6和IL-8较对照组明显增高,说明在过敏原刺激下肺泡巨噬细胞成相对激活状态,它分泌过多的IL-6和IL-8参与促发促进哮喘免疫炎性反应，与文献报道一致［2，3］。加LPS后,两组IL-6和IL-8分泌均增加,提示LPS对肺泡巨噬细胞的活化具有促进作用；而加LPS和hIL-10后,两组均比只加LPS时明显减低,说明hIL-10可抑制巨噬细胞分泌IL-6和IL-8。IL-10作为一种免疫抑制因子,可抑制多种细胞合成其他细胞因子, 通过抑制γ干扰素的产生,发挥强有力的抗炎作用［4］。表明IL-10作为一种抗炎细胞因子有望运用于临床,预防和治疗支气管哮喘。 本课题受山西省归国人员基金资助(晋教计财［1997］106号)
作者单位：030001 太原，山西医科大学第二医院呼吸内科 参考文献 1 支气管肺泡灌洗及灌洗液的细胞计数分类技术规范.中华结核和呼吸杂志，1994，17：10 .
2 Gosset P, Tsicopoulos A, Wallaert B, et al. Inc reased secretion of tumor necrosis factor alpha and interleukin-6 by alveolar macrophages c onsecutive to the development of the late asthmatic reaction. J Alle rgy Clin Immunol,1991,88:561-571.
3 Nocker RE, Schoonbrood DF, van de Graaf EA, et al. Interleukin-8 in airway inflammation in patients with asthma and chronic obstructive pu lmonary disease. Int Arch Allergy Immunol, 1996,109:183-191.
4 Koning H, Neijens HJ,Baert MR, et al. T cells subsets and cytokines in allergic and non-allergic children Ⅱ. Analysis and IL-5 and I L-10 mRNA expression and protein production . Cytokine, 1997,9:427-436. （收稿：1998-08-11 修回：1999-08-02） |
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